观察(cha)的(de)(de)(de)内容包括细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)是否生(sheng)长(zhang)良好，形态是否正(zheng)常(chang)(chang)，有(you)无污染，培养(yang)(yang)基的(de)(de)(de)PH是否太酸或太碱（由酚红指(zhi)示剂(ji)指(zhi)示），此外对培养(yang)(yang)温(wen)(wen)度(du)和CO2浓度(du)也要定时(shi)(shi)检查。一(yi)般(ban)(ban)原代(dai)培养(yang)(yang)进入(ru)培养(yang)(yang)后有(you)一(yi)段潜伏(fu)期（数小时(shi)(shi)到(dao)数十天不(bu)等），在(zai)(zai)潜伏(fu)期细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)一(yi)般(ban)(ban)不(bu)分(fen)裂(lie)，但可贴(tie)壁和游走。过了潜伏(fu)期后细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)进入(ru)旺盛的(de)(de)(de)分(fen)裂(lie)生(sheng)长(zhang)期。细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)长(zhang)满瓶(ping)底(di)后要进行传(chuan)(chuan)代(dai)培养(yang)(yang)，将(jiang)一(yi)瓶(ping)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)消化(hua)悬浮(fu)后分(fen)至(zhi)两到(dao)三瓶(ping)继续(xu)培养(yang)(yang)。每传(chuan)(chuan)代(dai)一(yi)次称为(wei)“一(yi)代(dai)”。二(er)倍体细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)一(yi)般(ban)(ban)只能传(chuan)(chuan)几十代(dai)，而(er)转化(hua)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)系或细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)株(zhu)则可无限(xian)地传(chuan)(chuan)代(dai)下去。转化(hua)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)可能具有(you)恶(e)性性质，也可能不(bu)死性（Immortality）而(er)无恶(e)性。培养(yang)(yang)正(zheng)在(zai)(zai)生(sheng)长(zhang)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)是进行各种生(sheng)物医学实验的(de)(de)(de)良好材料。四、冻(dong)存(cun)(cun)(cun)(cun)及复苏(su)为(wei)了保(bao)存(cun)(cun)(cun)(cun)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，特别是不(bu)易获得(de)的(de)(de)(de)突变型细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)或细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)株(zhu)，要将(jiang)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)冻(dong)存(cun)(cun)(cun)(cun)。冻(dong)存(cun)(cun)(cun)(cun)的(de)(de)(de)温(wen)(wen)度(du)一(yi)般(ban)(ban)用液氮的(de)(de)(de)温(wen)(wen)度(du)—－196℃，将(jiang)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)收(shou)集至(zhi)冻(dong)存(cun)(cun)(cun)(cun)管(guan)(guan)中(zhong)(zhong)(zhong)加(jia)入(ru)含保(bao)护剂(ji)（一(yi)般(ban)(ban)为(wei)二(er)甲亚砜或甘油(you)）的(de)(de)(de)培养(yang)(yang)基，以一(yi)定的(de)(de)(de)冷却速(su)度(du)冻(dong)存(cun)(cun)(cun)(cun)，终保(bao)存(cun)(cun)(cun)(cun)于液氮中(zhong)(zhong)(zhong)。在(zai)(zai)极低的(de)(de)(de)温(wen)(wen)度(du)下，细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)保(bao)存(cun)(cun)(cun)(cun)的(de)(de)(de)时(shi)(shi)间(jian)几乎(hu)是无限(xian)的(de)(de)(de)。复苏(su)一(yi)般(ban)(ban)采用快融方法，即从液氮中(zhong)(zhong)(zhong)取出冻(dong)存(cun)(cun)(cun)(cun)管(guan)(guan)后，立即放入(ru)37℃水中(zhong)(zhong)(zhong)，使之在(zai)(zai)一(yi)分(fen)钟内迅速(su)融解。然后将(jiang)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)转入(ru)培养(yang)(yang)器皿中(zhong)(zhong)(zhong)进行培养(yang)(yang)。心(xin)脏(zang)中(zhong)(zhong)(zhong)，心(xin)肌(ji)成纤维细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)约占正(zheng)常(chang)(chang)心(xin)肌(ji)组织细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)总(zong)数的(de)(de)(de)60%-70%。云南小鼠原代(dai)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)分(fen)离(li)

在短时间内即可(ke)大(da)量(liang)扩增，并产生(sheng)(sheng)(sheng)杀死(si)(si)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)。的(de)(de)(de)(de)(de)种类(lei)(lei)繁多(duo)(duo)，肉眼可(ke)见，漂浮于(yu)(yu)培(pei)养(yang)液(ye)(ye)面(mian)上，可(ke)呈丝状(zhuang)、管状(zhuang)或树枝(zhi)状(zhuang)等。2.合适(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)温度(du)一(yi)般哺乳类(lei)(lei)与禽类(lei)(lei)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)在体(ti)(ti)外培(pei)养(yang)的(de)(de)(de)(de)(de)适(shi)宜温度(du)是(shi)(shi)(shi)37～38℃，不(bu)适(shi)宜的(de)(de)(de)(de)(de)环境(jing)温度(du)会影(ying)(ying)响(xiang)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)长(zhang)。细(xi)(xi)胞(bao)(bao)对低(di)(di)温的(de)(de)(de)(de)(de)耐受(shou)能(neng)力(li)要(yao)强于(yu)(yu)对高温的(de)(de)(de)(de)(de)耐受(shou)能(neng)力(li)，在低(di)(di)温下，细(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)代谢(xie)活力(li)及(ji)核(he)分(fen)裂能(neng)力(li)降(jiang)低(di)(di)。若温度(du)不(bu)低(di)(di)于(yu)(yu)0℃，虽(sui)然(ran)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)代谢(xie)受(shou)到影(ying)(ying)响(xiang)，但无损伤作用(yong)(yong)(yong)；25～35℃时，细(xi)(xi)胞(bao)(bao)以缓慢(man)的(de)(de)(de)(de)(de)速度(du)生(sheng)(sheng)(sheng)长(zhang)；但若被置于(yu)(yu)40℃数(shu)小时，则不(bu)不(bu)利于(yu)(yu)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)生(sheng)(sheng)(sheng)存、生(sheng)(sheng)(sheng)长(zhang)，甚(shen)至可(ke)导致其死(si)(si)亡。3.适(shi)宜的(de)(de)(de)(de)(de)渗(shen)透压高渗(shen)溶(rong)液(ye)(ye)或低(di)(di)渗(shen)溶(rong)液(ye)(ye)会引起细(xi)(xi)胞(bao)(bao)发生(sheng)(sheng)(sheng)褶皱、肿(zhong)胀、破裂。因此，渗(shen)透压是(shi)(shi)(shi)体(ti)(ti)外培(pei)养(yang)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)重要(yao)条件之一(yi)。多(duo)(duo)数(shu)体(ti)(ti)外培(pei)养(yang)的(de)(de)(de)(de)(de)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)对渗(shen)透压都有一(yi)定(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)耐受(shou)能(neng)力(li)，实(shi)际(ji)应用(yong)(yong)(yong)中，260～320mmol/L的(de)(de)(de)(de)(de)渗(shen)透压可(ke)适(shi)用(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)大(da)多(duo)(duo)数(shu)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)。4．气(qi)体(ti)(ti)环境(jing)与pH细(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)体(ti)(ti)外培(pei)养(yang)需要(yao)理想的(de)(de)(de)(de)(de)气(qi)体(ti)(ti)环境(jing)，氧气(qi)、二(er)氧化碳是(shi)(shi)(shi)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)生(sheng)(sheng)(sheng)存的(de)(de)(de)(de)(de)必(bi)要(yao)条件。氧气(qi)参(can)与细(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)三羧(suo)酸循环，为细(xi)(xi)胞(bao)(bao)生(sheng)(sheng)(sheng)存、代谢(xie)与合成提供能(neng)量(liang)；二(er)氧化碳既是(shi)(shi)(shi)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)代谢(xie)产物(wu)，是(shi)(shi)(shi)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)生(sheng)(sheng)(sheng)长(zhang)的(de)(de)(de)(de)(de)必(bi)需成分(fen)，又与维持(chi)培(pei)养(yang)液(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)pH有关(guan)。大(da)多(duo)(duo)数(shu)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)适(shi)宜的(de)(de)(de)(de)(de)pH范围(wei)往往是(shi)(shi)(shi)～。在开放式(shi)培(pei)养(yang)中，以5%的(de)(de)(de)(de)(de)二(er)氧化碳气(qi)体(ti)(ti)比例(li)为宜。宁夏(xia)血液(ye)(ye)原代细(xi)(xi)胞(bao)(bao)购买人脐静(jing)(jing)脉内皮细(xi)(xi)胞(bao)(bao)分(fen)离自脐带静(jing)(jing)脉，一(yi)般用(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)生(sheng)(sheng)(sheng)理学和药理学研究(jiu)。

下端伸入(ru)瓶身(shen)(shen)(shen)并与设(she)(she)(she)于瓶身(shen)(shen)(shen)内(nei)的(de)(de)(de)(de)纤(xian)(xian)维(wei)板(ban)固定连接，并且在活(huo)动(dong)圆(yuan)(yuan)(yuan)盘和(he)纤(xian)(xian)维(wei)圆(yuan)(yuan)(yuan)盘之间的(de)(de)(de)(de)连接杆上套装有弹(dan)簧。进(jin)一步的(de)(de)(de)(de)，所述(shu)活(huo)动(dong)圆(yuan)(yuan)(yuan)盘的(de)(de)(de)(de)四(si)周(zhou)设(she)(she)(she)有密封圈。进(jin)一步的(de)(de)(de)(de)，所述(shu)弹(dan)簧处(chu)于自然(ran)状态(tai)或轻(qing)微(wei)压缩(suo)状态(tai)时，活(huo)动(dong)圆(yuan)(yuan)(yuan)盘与阻(zu)(zu)隔环(huan)相接触。进(jin)一步的(de)(de)(de)(de)，所述(shu)纤(xian)(xian)维(wei)板(ban)采(cai)用(yong)具(ju)有阻(zu)(zu)隔和(he)透气特性的(de)(de)(de)(de)柔(rou)性网格纤(xian)(xian)维(wei)材料制作(zuo)(zuo)。进(jin)一步的(de)(de)(de)(de)，所述(shu)外(wai)接圆(yuan)(yuan)(yuan)柱的(de)(de)(de)(de)直(zhi)径为(wei)(wei)(wei)2cm，所述(shu)正压口的(de)(de)(de)(de)直(zhi)径为(wei)(wei)(wei)5mm，并可(ke)(ke)采(cai)用(yong)肝素帽封闭。进(jin)一步的(de)(de)(de)(de)，所述(shu)活(huo)动(dong)圆(yuan)(yuan)(yuan)盘和(he)纤(xian)(xian)维(wei)圆(yuan)(yuan)(yuan)盘的(de)(de)(de)(de)直(zhi)径为(wei)(wei)(wei)。进(jin)一步的(de)(de)(de)(de)，所述(shu)加样口为(wei)(wei)(wei)直(zhi)径，该开口可(ke)(ke)通过螺纹(wen)连接透气瓶盖。进(jin)一步的(de)(de)(de)(de)，所述(shu)瓶身(shen)(shen)(shen)底部(bu)的(de)(de)(de)(de)四(si)个角(jiao)设(she)(she)(she)置有8个直(zhi)角(jiao)三角(jiao)支(zhi)架。本(ben)(ben)发(fa)明(ming)(ming)的(de)(de)(de)(de)有益效果如(ru)下：本(ben)(ben)发(fa)明(ming)(ming)可(ke)(ke)以(yi)根据所要爬(pa)片的(de)(de)(de)(de)组(zu)织块大(da)小(xiao)和(he)数量提(ti)供(gong)25cm2和(he)75cm2两(liang)种(zhong)不同规格长(zhang)方(fang)体(ti)瓶身(shen)(shen)(shen)供(gong)爬(pa)片，能提(ti)高爬(pa)片的(de)(de)(de)(de)效率。本(ben)(ben)发(fa)明(ming)(ming)采(cai)用(yong)一体(ti)式设(she)(she)(she)计(ji)，减少了原代细(xi)胞提(ti)取过程中易发(fa)生(sheng)的(de)(de)(de)(de)污染的(de)(de)(de)(de)可(ke)(ke)能性，另外(wai)一体(ti)式设(she)(she)(she)计(ji)也减少了新(xin)手(shou)或不熟练操(cao)作(zuo)(zuo)流(liu)程实验员的(de)(de)(de)(de)时间成本(ben)(ben)和(he)器材消耗(hao)。本(ben)(ben)发(fa)明(ming)(ming)巧妙的(de)(de)(de)(de)利用(yong)纤(xian)(xian)维(wei)网格板(ban)，一方(fang)面网格板(ban)的(de)(de)(de)(de)材质是柔(rou)性的(de)(de)(de)(de)，不易因形变而(er)碎裂，另一方(fang)面不仅可(ke)(ke)以(yi)固定组(zu)织块，网格设(she)(she)(she)计(ji)还可(ke)(ke)以(yi)让培(pei)养(yang)基渗(shen)入(ru)，可(ke)(ke)谓一举(ju)两(liang)得，且网格板(ban)孔径大(da)小(xiao)可(ke)(ke)以(yi)定制，满(man)足(zu)不同受(shou)众的(de)(de)(de)(de)要求。

每15min摇晃一(yi)次，消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)时(shi)间根(gen)据组(zu)(zu)(zu)(zu)织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)来定，约1-2h；5.待大(da)部分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)组(zu)(zu)(zu)(zu)织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)块消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)成(cheng)透明状(zhuang)时(shi)，用40μm的(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)滤网(wang)过滤细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)，收(shou)集；6.用培养(yang)(yang)(yang)基重(zhong)悬，置于(yu)培养(yang)(yang)(yang)箱培养(yang)(yang)(yang)。常见问题解答：Q：为什么(me)我取(qu)得原(yuan)代织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)，分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)离的(de)(de)(de)却不是细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)？A：取(qu)材(cai)时(shi)，我们要熟悉所需(xu)组(zu)(zu)(zu)(zu)织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)类(lei)型(xing)和(he)部位特征，选(xuan)(xuan)择(ze)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)集中(zhong)(zhong)、活力较(jiao)(jiao)好的(de)(de)(de)部分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)。避免(mian)结(jie)缔等正常组(zu)(zu)(zu)(zu)织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)。Q：若是细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)中(zhong)(zhong)混成(cheng)纤(xian)(xian)(xian)(xian)维(wei)(wei)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)，如(ru)何(he)(he)去除(chu)？A：成(cheng)纤(xian)(xian)(xian)(xian)维(wei)(wei)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)去除(chu)对(dui)于(yu)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)培养(yang)(yang)(yang)十(shi)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)重(zhong)要。由于(yu)成(cheng)纤(xian)(xian)(xian)(xian)维(wei)(wei)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)贴(tie)壁速(su)度细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)快，可利(li)用反(fan)复贴(tie)壁法(fa)使(shi)二者(zhe)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)离，进而达到(dao)成(cheng)纤(xian)(xian)(xian)(xian)维(wei)(wei)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)。Q：为什么(me)离心后，没有细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)离出(chu)来？A：需(xu)要考虑消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)酶(mei)的(de)(de)(de)因素，由于(yu)组(zu)(zu)(zu)(zu)织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)较(jiao)(jiao)致(zhi)密(mi)，胰酶(mei)无法(fa)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)，一(yi)般(ban)选(xuan)(xuan)用胶原(yuan)酶(mei)，如(ru)胶原(yuan)酶(mei)Ⅳ。若是组(zu)(zu)(zu)(zu)织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)十(shi)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)致(zhi)密(mi)可以(yi)再结(jie)合(he)机械法(fa)，如(ru)研(yan)磨(mo)或者(zhe)搅拌加(jia)速(su)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)散。如(ru)下表(biao)为二者(zhe)的(de)(de)(de)区别：胶原(yuan)酶(mei)胰酶(mei)来源细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)菌胰脏消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)组(zu)(zu)(zu)(zu)织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)纤(xian)(xian)(xian)(xian)维(wei)(wei)多的(de)(de)(de)硬组(zu)(zu)(zu)(zu)织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)软组(zu)(zu)(zu)(zu)织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)对(dui)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)影响伤(shang)害小长时(shi)间有损伤(shang)作用力度缓和(he)强注：胶原(yuan)酶(mei)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型(xing)以(yi)及肝细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)胶原(yuan)酶(mei)，根(gen)据分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)离的(de)(de)(de)组(zu)(zu)(zu)(zu)织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)类(lei)型(xing)需(xu)选(xuan)(xuan)择(ze)合(he)适(shi)的(de)(de)(de)胶原(yuan)酶(mei)类(lei)型(xing)。Q：消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)时(shi)间如(ru)何(he)(he)确(que)定？A：具体的(de)(de)(de)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)酶(mei)的(de)(de)(de)量和(he)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)时(shi)间可根(gen)据组(zu)(zu)(zu)(zu)织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)类(lei)型(xing)和(he)多少(shao)进行调整。Q：消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)之前为什么(me)用EDTA?A：EDTA是一(yi)种非酶(mei)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)(hua)(hua)物，又称(cheng)螯合(he)剂，对(dui)一(yi)些组(zu)(zu)(zu)(zu)织(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)。转染的(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)是产生重(zhong)组(zu)(zu)(zu)(zu)蛋白，或特异性增强或控制(zhi)转染细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)基因表(biao)达。

展开(kai)全(quan)部(bu)原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)2113细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)和传(chuan)代(dai)(dai)(dai)细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)有(you)(you)含(han)(han)义5261、培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)过程(cheng)(cheng)、培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)结果(guo)和应(ying)用四个方(fang)面(mian)4102区别：16531、含(han)(han)义不同(tong)原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)是直接从生物(wu)(wu)体(ti)(ti)获(huo)取组织或的(de)(de)(de)(de)一部(bu)分(fen)进行(xing)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，也(ye)称(cheng)初代(dai)(dai)(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)。原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)是将(jiang)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)物(wu)(wu)放置在(zai)体(ti)(ti)外生长环(huan)境中持续(xu)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，中途不分(fen)割培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)过程(cheng)(cheng)。有(you)(you)几方(fang)面(mian)含(han)(han)义：原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)中的(de)(de)(de)(de)代(dai)(dai)(dai)并非细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)代(dai)(dai)(dai)数(shu)，因为(wei)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)过程(cheng)(cheng)中细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)经多次(ci)分(fen)裂已(yi)经产生多代(dai)(dai)(dai)子细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)。传(chuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)是指需要将(jiang)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)物(wu)(wu)分(fen)割成小(xiao)的(de)(de)(de)(de)部(bu)分(fen)，重新(xin)(xin)接种(zhong)到另外的(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)器(qi)皿（瓶）内，再进行(xing)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)的(de)(de)(de)(de)过程(cheng)(cheng)。2、培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)过程(cheng)(cheng)不同(tong)原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)的(de)(de)(de)(de)基本过程(cheng)(cheng)包括取材(cai)(cai)、培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)材(cai)(cai)料(liao)的(de)(de)(de)(de)制备、接种(zhong)、加(jia)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)液(ye)、置培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)条(tiao)件下培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)等步骤(zhou)，在(zai)所有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)操作(zuo)过程(cheng)(cheng)中，都必须保(bao)持培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)物(wu)(wu)及生长环(huan)境的(de)(de)(de)(de)无菌(jun)。传(chuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)时(shi)要注(zhu)意无菌(jun)操作(zuo)并防止细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)之(zhi)间(jian)的(de)(de)(de)(de)交叉污染。所有(you)(you)操作(zuo)要尽量靠近酒(jiu)精(jing)灯火焰。每次(ci)只进行(xing)一种(zhong)细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)操作(zuo)。取出(chu)长成单层的(de)(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，倒(dao)掉瓶内培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)液(ye)，加(jia)入消化液(ye)。细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)变圆(yuan)，相互之(zhi)间(jian)不再连片时(shi)将(jiang)消化液(ye)倒(dao)掉，加(jia)入新(xin)(xin)鲜培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)液(ye)，吹打，制成细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)悬液(ye)。3、培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)结果(guo)不同(tong)原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)会(hui)分(fen)裂。原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)的(de)(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)一般传(chuan)至(zhi)10代(dai)(dai)(dai)左(zuo)右就不容易(yi)传(chuan)下去了，细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)生长就会(hui)出(chu)现停(ting)滞，大(da)部(bu)分(fen)细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)衰老死亡。细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)接种(zhong)后一般几小(xiao)时(shi)内就能(neng)贴壁，并开(kai)始生长。本公司生产的(de)(de)(de)(de)SD大(da)鼠(shu)心肌成纤维细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)采用混(hun)合(he)酶(mei)消化、密度梯(ti)度离心制备而来。内蒙(meng)古(gu)大(da)鼠(shu)原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)细(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)购买

细胞(bao)操(cao)作都需(xu)严(yan)格(ge)按照无(wu)菌操(cao)作进行。云南小鼠原(yuan)代细胞(bao)分离(li)

本实(shi)(shi)用(yong)新型(xing)涉及细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)(xiang)(xiang)领域，尤其(qi)涉及的(de)(de)(de)是(shi)(shi)一种新型(xing)原(yuan)(yuan)代(dai)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)(xiang)(xiang)。背景技(ji)术：现(xian)有技(ji)术中，原(yuan)(yuan)代(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，是(shi)(shi)指由体内取出(chu)组(zu)织或(huo)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)进(jin)(jin)行(xing)(xing)的(de)(de)(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，也(ye)(ye)叫初代(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)。原(yuan)(yuan)代(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)离体时(shi)(shi)间(jian)(jian)短，遗传性(xing)状和(he)体内细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)相似，适于做细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)形态、功能(neng)和(he)分化等(deng)研(yan)究。较为(wei)严格地(di)说是(shi)(shi)指成功传代(dai)之前的(de)(de)(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，此时(shi)(shi)的(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)保持原(yuan)(yuan)有细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)基本性(xing)质(zhi)，如果(guo)是(shi)(shi)正常(chang)(chang)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，仍然(ran)保留二倍体数。但实(shi)(shi)际上(shang)，通常(chang)(chang)把代(dai)至(zhi)第(di)十代(dai)以内的(de)(de)(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)统称(cheng)为(wei)原(yuan)(yuan)代(dai)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)。利(li)用(yong)原(yuan)(yuan)代(dai)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，可(ke)对(dui)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)进(jin)(jin)行(xing)(xing)药(yao)物的(de)(de)(de)筛选，根(gen)据细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)对(dui)加(jia)入(ru)的(de)(de)(de)化疗药(yao)物的(de)(de)(de)敏感性(xing)来帮助(zhu)选择(ze)的(de)(de)(de)化疗方案(an)，有可(ke)能(neng)起(qi)到增强疗效、降低(di)副作(zuo)用(yong)的(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)。而实(shi)(shi)验室在(zai)进(jin)(jin)行(xing)(xing)原(yuan)(yuan)代(dai)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)过(guo)程中，为(wei)得到更多(duo)的(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)进(jin)(jin)行(xing)(xing)筛查(cha)，往往需要同时(shi)(shi)对(dui)大(da)(da)量(liang)的(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)进(jin)(jin)行(xing)(xing)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，而市(shi)面(mian)(mian)上(shang)单层或(huo)双(shuang)层设计的(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)(xiang)(xiang)已难以满(man)足实(shi)(shi)验者的(de)(de)(de)需求，另(ling)外市(shi)面(mian)(mian)上(shang)也(ye)(ye)有一些(xie)原(yuan)(yuan)代(dai)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)(xiang)(xiang)，但其(qi)储藏空间(jian)(jian)设计不合理，空间(jian)(jian)利(li)用(yong)率低(di)，在(zai)存放大(da)(da)量(liang)的(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)皿(min)(min)时(shi)(shi)，其(qi)占地(di)面(mian)(mian)积也(ye)(ye)大(da)(da)，不方便实(shi)(shi)验者存放。同时(shi)(shi)，无(wu)毒和(he)无(wu)菌是(shi)(shi)体外培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)首要条件，培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)皿(min)(min)作(zuo)为(wei)用(yong)于细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)的(de)(de)(de)主(zhu)要实(shi)(shi)验室器皿(min)(min)，常(chang)(chang)存储于细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)(xiang)(xiang)内进(jin)(jin)行(xing)(xing)贮藏培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，市(shi)场上(shang)的(de)(de)(de)大(da)(da)型(xing)原(yuan)(yuan)代(dai)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)(xiang)(xiang)由于空间(jian)(jian)设计过(guo)大(da)(da)。云南(nan)小鼠原(yuan)(yuan)代(dai)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)分离

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