观(guan)察的(de)(de)(de)内容包(bao)括细(xi)(xi)胞是(shi)(shi)否生长良(liang)好，形态是(shi)(shi)否正(zheng)常(chang)，有无(wu)污染，培(pei)养基的(de)(de)(de)PH是(shi)(shi)否太(tai)酸(suan)或太(tai)碱（由(you)酚红指(zhi)示剂指(zhi)示），此外对培(pei)养温(wen)(wen)度和CO2浓度也要定时(shi)检查(cha)。一(yi)(yi)(yi)(yi)般(ban)原(yuan)代培(pei)养进入(ru)(ru)(ru)培(pei)养后(hou)(hou)有一(yi)(yi)(yi)(yi)段潜(qian)伏(fu)期(qi)(qi)（数小时(shi)到(dao)数十天不(bu)等(deng)），在(zai)潜(qian)伏(fu)期(qi)(qi)细(xi)(xi)胞一(yi)(yi)(yi)(yi)般(ban)不(bu)分(fen)(fen)裂，但可贴壁和游走(zou)。过(guo)了潜(qian)伏(fu)期(qi)(qi)后(hou)(hou)细(xi)(xi)胞进入(ru)(ru)(ru)旺盛(sheng)的(de)(de)(de)分(fen)(fen)裂生长期(qi)(qi)。细(xi)(xi)胞长满瓶(ping)底后(hou)(hou)要进行(xing)传(chuan)(chuan)代培(pei)养，将一(yi)(yi)(yi)(yi)瓶(ping)中(zhong)的(de)(de)(de)细(xi)(xi)胞消化悬浮后(hou)(hou)分(fen)(fen)至(zhi)两到(dao)三瓶(ping)继续培(pei)养。每(mei)传(chuan)(chuan)代一(yi)(yi)(yi)(yi)次称(cheng)为(wei)(wei)“一(yi)(yi)(yi)(yi)代”。二倍体细(xi)(xi)胞一(yi)(yi)(yi)(yi)般(ban)只能(neng)传(chuan)(chuan)几(ji)十代，而(er)转化细(xi)(xi)胞系(xi)或细(xi)(xi)胞株则可无(wu)限地传(chuan)(chuan)代下去。转化细(xi)(xi)胞可能(neng)具有恶性性质(zhi)，也可能(neng)不(bu)死(si)性（Immortality）而(er)无(wu)恶性。培(pei)养正(zheng)在(zai)生长中(zhong)的(de)(de)(de)细(xi)(xi)胞是(shi)(shi)进行(xing)各种生物医(yi)学实验的(de)(de)(de)良(liang)好材料。四、冻存(cun)(cun)(cun)及(ji)复苏(su)为(wei)(wei)了保存(cun)(cun)(cun)细(xi)(xi)胞，特别是(shi)(shi)不(bu)易获得的(de)(de)(de)突变型细(xi)(xi)胞或细(xi)(xi)胞株，要将细(xi)(xi)胞冻存(cun)(cun)(cun)。冻存(cun)(cun)(cun)的(de)(de)(de)温(wen)(wen)度一(yi)(yi)(yi)(yi)般(ban)用(yong)液(ye)(ye)氮的(de)(de)(de)温(wen)(wen)度—－196℃，将细(xi)(xi)胞收集至(zhi)冻存(cun)(cun)(cun)管中(zhong)加入(ru)(ru)(ru)含(han)保护(hu)剂（一(yi)(yi)(yi)(yi)般(ban)为(wei)(wei)二甲亚砜或甘油）的(de)(de)(de)培(pei)养基，以一(yi)(yi)(yi)(yi)定的(de)(de)(de)冷(leng)却速度冻存(cun)(cun)(cun)，终保存(cun)(cun)(cun)于(yu)液(ye)(ye)氮中(zhong)。在(zai)极低的(de)(de)(de)温(wen)(wen)度下，细(xi)(xi)胞保存(cun)(cun)(cun)的(de)(de)(de)时(shi)间(jian)几(ji)乎(hu)是(shi)(shi)无(wu)限的(de)(de)(de)。复苏(su)一(yi)(yi)(yi)(yi)般(ban)采用(yong)快(kuai)融方(fang)法，即(ji)从液(ye)(ye)氮中(zhong)取出冻存(cun)(cun)(cun)管后(hou)(hou)，立即(ji)放入(ru)(ru)(ru)37℃水中(zhong)，使之在(zai)一(yi)(yi)(yi)(yi)分(fen)(fen)钟(zhong)内迅速融解。然(ran)后(hou)(hou)将细(xi)(xi)胞转入(ru)(ru)(ru)培(pei)养器皿中(zhong)进行(xing)培(pei)养。心脏中(zhong)，心肌(ji)成纤维细(xi)(xi)胞约占正(zheng)常(chang)心肌(ji)组(zu)织细(xi)(xi)胞总数的(de)(de)(de)60%-70%。云南小鼠原(yuan)代细(xi)(xi)胞分(fen)(fen)离

在(zai)短时(shi)间内即可(ke)(ke)大(da)量扩增，并产(chan)生(sheng)杀(sha)死细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)。的(de)(de)(de)(de)种(zhong)类(lei)繁多，肉眼(yan)可(ke)(ke)见，漂浮于培(pei)养(yang)液面上，可(ke)(ke)呈(cheng)丝状、管状或(huo)树枝状等。2.合适(shi)的(de)(de)(de)(de)温(wen)(wen)度一(yi)(yi)般哺乳类(lei)与禽类(lei)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)在(zai)体外(wai)培(pei)养(yang)的(de)(de)(de)(de)适(shi)宜温(wen)(wen)度是(shi)37～38℃，不(bu)适(shi)宜的(de)(de)(de)(de)环境温(wen)(wen)度会影响细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)生(sheng)长(zhang)。细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)对低温(wen)(wen)的(de)(de)(de)(de)耐(nai)受(shou)能力(li)(li)(li)要(yao)强(qiang)于对高温(wen)(wen)的(de)(de)(de)(de)耐(nai)受(shou)能力(li)(li)(li)，在(zai)低温(wen)(wen)下，细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)代谢(xie)活力(li)(li)(li)及(ji)核(he)分(fen)裂能力(li)(li)(li)降低。若温(wen)(wen)度不(bu)低于0℃，虽然细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)代谢(xie)受(shou)到影响，但(dan)无损(sun)伤作(zuo)用(yong)(yong)；25～35℃时(shi)，细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)以(yi)缓慢的(de)(de)(de)(de)速度生(sheng)长(zhang)；但(dan)若被置于40℃数(shu)小时(shi)，则不(bu)不(bu)利于细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)存、生(sheng)长(zhang)，甚至可(ke)(ke)导致其死亡(wang)。3.适(shi)宜的(de)(de)(de)(de)渗(shen)(shen)透(tou)压高渗(shen)(shen)溶(rong)液或(huo)低渗(shen)(shen)溶(rong)液会引起细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)发生(sheng)褶皱、肿胀、破裂。因此，渗(shen)(shen)透(tou)压是(shi)体外(wai)培(pei)养(yang)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)重要(yao)条件之一(yi)(yi)。多数(shu)体外(wai)培(pei)养(yang)的(de)(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)对渗(shen)(shen)透(tou)压都有一(yi)(yi)定的(de)(de)(de)(de)耐(nai)受(shou)能力(li)(li)(li)，实际应(ying)用(yong)(yong)中，260～320mmol/L的(de)(de)(de)(de)渗(shen)(shen)透(tou)压可(ke)(ke)适(shi)用(yong)(yong)于大(da)多数(shu)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)。4．气(qi)体环境与pH细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)体外(wai)培(pei)养(yang)需要(yao)理(li)想的(de)(de)(de)(de)气(qi)体环境，氧气(qi)、二氧化碳是(shi)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)存的(de)(de)(de)(de)必要(yao)条件。氧气(qi)参与细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)三羧酸循环，为(wei)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)存、代谢(xie)与合成(cheng)提供能量；二氧化碳既是(shi)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)代谢(xie)产(chan)物(wu)，是(shi)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)长(zhang)的(de)(de)(de)(de)必需成(cheng)分(fen)，又与维(wei)持(chi)培(pei)养(yang)液的(de)(de)(de)(de)pH有关。大(da)多数(shu)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)适(shi)宜的(de)(de)(de)(de)pH范围往往是(shi)～。在(zai)开放式培(pei)养(yang)中，以(yi)5%的(de)(de)(de)(de)二氧化碳气(qi)体比例为(wei)宜。宁夏血液原(yuan)代细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)购(gou)买人脐静(jing)脉(mai)(mai)内皮细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)分(fen)离(li)自脐带(dai)静(jing)脉(mai)(mai)，一(yi)(yi)般用(yong)(yong)于生(sheng)理(li)学和药理(li)学研究。

下(xia)端伸入瓶(ping)(ping)(ping)身(shen)(shen)并(bing)与设(she)(she)于瓶(ping)(ping)(ping)身(shen)(shen)内(nei)的(de)(de)(de)(de)纤维(wei)(wei)板(ban)固定连(lian)(lian)接(jie)，并(bing)且在(zai)活动圆(yuan)盘(pan)(pan)和纤维(wei)(wei)圆(yuan)盘(pan)(pan)之间(jian)的(de)(de)(de)(de)连(lian)(lian)接(jie)杆上套装(zhuang)有(you)(you)弹(dan)簧(huang)。进(jin)一(yi)步(bu)(bu)(bu)(bu)的(de)(de)(de)(de)，所(suo)(suo)(suo)述(shu)(shu)活动圆(yuan)盘(pan)(pan)的(de)(de)(de)(de)四周设(she)(she)有(you)(you)密封圈。进(jin)一(yi)步(bu)(bu)(bu)(bu)的(de)(de)(de)(de)，所(suo)(suo)(suo)述(shu)(shu)弹(dan)簧(huang)处于自然(ran)状态(tai)或轻微(wei)压缩(suo)状态(tai)时，活动圆(yuan)盘(pan)(pan)与阻隔环相接(jie)触。进(jin)一(yi)步(bu)(bu)(bu)(bu)的(de)(de)(de)(de)，所(suo)(suo)(suo)述(shu)(shu)纤维(wei)(wei)板(ban)采用(yong)具(ju)有(you)(you)阻隔和透气特(te)性(xing)的(de)(de)(de)(de)柔性(xing)网格(ge)纤维(wei)(wei)材(cai)料制(zhi)作。进(jin)一(yi)步(bu)(bu)(bu)(bu)的(de)(de)(de)(de)，所(suo)(suo)(suo)述(shu)(shu)外接(jie)圆(yuan)柱的(de)(de)(de)(de)直(zhi)径为2cm，所(suo)(suo)(suo)述(shu)(shu)正压口(kou)的(de)(de)(de)(de)直(zhi)径为5mm，并(bing)可(ke)采用(yong)肝素帽封闭。进(jin)一(yi)步(bu)(bu)(bu)(bu)的(de)(de)(de)(de)，所(suo)(suo)(suo)述(shu)(shu)活动圆(yuan)盘(pan)(pan)和纤维(wei)(wei)圆(yuan)盘(pan)(pan)的(de)(de)(de)(de)直(zhi)径为。进(jin)一(yi)步(bu)(bu)(bu)(bu)的(de)(de)(de)(de)，所(suo)(suo)(suo)述(shu)(shu)加(jia)样口(kou)为直(zhi)径，该开口(kou)可(ke)通过(guo)螺(luo)纹连(lian)(lian)接(jie)透气瓶(ping)(ping)(ping)盖。进(jin)一(yi)步(bu)(bu)(bu)(bu)的(de)(de)(de)(de)，所(suo)(suo)(suo)述(shu)(shu)瓶(ping)(ping)(ping)身(shen)(shen)底部的(de)(de)(de)(de)四个角设(she)(she)置(zhi)有(you)(you)8个直(zhi)角三角支(zhi)架(jia)。本(ben)(ben)发(fa)明(ming)的(de)(de)(de)(de)有(you)(you)益效(xiao)果如下(xia)：本(ben)(ben)发(fa)明(ming)可(ke)以根据所(suo)(suo)(suo)要爬片(pian)的(de)(de)(de)(de)组织块(kuai)大(da)小和数量提(ti)(ti)供25cm2和75cm2两种不同规格(ge)长方体(ti)瓶(ping)(ping)(ping)身(shen)(shen)供爬片(pian)，能提(ti)(ti)高爬片(pian)的(de)(de)(de)(de)效(xiao)率。本(ben)(ben)发(fa)明(ming)采用(yong)一(yi)体(ti)式设(she)(she)计(ji)，减(jian)少了原代(dai)细胞提(ti)(ti)取过(guo)程中易(yi)发(fa)生的(de)(de)(de)(de)污染的(de)(de)(de)(de)可(ke)能性(xing)，另外一(yi)体(ti)式设(she)(she)计(ji)也减(jian)少了新手或不熟练操作流(liu)程实(shi)验员的(de)(de)(de)(de)时间(jian)成本(ben)(ben)和器材(cai)消耗。本(ben)(ben)发(fa)明(ming)巧(qiao)妙的(de)(de)(de)(de)利用(yong)纤维(wei)(wei)网格(ge)板(ban)，一(yi)方面(mian)网格(ge)板(ban)的(de)(de)(de)(de)材(cai)质(zhi)是柔性(xing)的(de)(de)(de)(de)，不易(yi)因形变(bian)而碎裂，另一(yi)方面(mian)不仅(jin)可(ke)以固定组织块(kuai)，网格(ge)设(she)(she)计(ji)还可(ke)以让培(pei)养基渗入，可(ke)谓一(yi)举两得，且网格(ge)板(ban)孔径大(da)小可(ke)以定制(zhi)，满足不同受众的(de)(de)(de)(de)要求。

每15min摇晃一(yi)次(ci)，消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)时(shi)间(jian)根据组(zu)织(zhi)(zhi)来定(ding)(ding)，约1-2h；5.待大(da)部(bu)分组(zu)织(zhi)(zhi)块(kuai)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)成(cheng)(cheng)透明状时(shi)，用(yong)(yong)40μm的(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)滤(lv)网过滤(lv)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，收集(ji)；6.用(yong)(yong)培(pei)养(yang)基重(zhong)悬，置(zhi)于(yu)培(pei)养(yang)箱培(pei)养(yang)。常见(jian)问题解答：Q：为(wei)什(shen)么(me)我取得(de)原(yuan)(yuan)(yuan)代织(zhi)(zhi)，分离(li)的(de)(de)却不是(shi)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)？A：取材时(shi)，我们要(yao)(yao)熟悉所需(xu)组(zu)织(zhi)(zhi)的(de)(de)类(lei)型(xing)和部(bu)位特征，选(xuan)择细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)集(ji)中、活力较(jiao)好的(de)(de)部(bu)分。避(bi)免(mian)结缔等正常组(zu)织(zhi)(zhi)。Q：若是(shi)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)中混成(cheng)(cheng)纤(xian)(xian)维(wei)(wei)(wei)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，如(ru)(ru)何去除？A：成(cheng)(cheng)纤(xian)(xian)维(wei)(wei)(wei)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)去除对(dui)于(yu)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)养(yang)十(shi)分重(zhong)要(yao)(yao)。由于(yu)成(cheng)(cheng)纤(xian)(xian)维(wei)(wei)(wei)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)贴壁速(su)度细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)快(kuai)，可(ke)利用(yong)(yong)反复贴壁法(fa)使二者分离(li)，进而达到成(cheng)(cheng)纤(xian)(xian)维(wei)(wei)(wei)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)目(mu)(mu)的(de)(de)。Q：为(wei)什(shen)么(me)离(li)心后，没(mei)有细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)分离(li)出来？A：需(xu)要(yao)(yao)考虑消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)酶(mei)(mei)的(de)(de)因素，由于(yu)组(zu)织(zhi)(zhi)较(jiao)致密(mi)(mi)，胰(yi)(yi)酶(mei)(mei)无法(fa)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)，一(yi)般选(xuan)用(yong)(yong)胶(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶(mei)(mei)，如(ru)(ru)胶(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶(mei)(mei)Ⅳ。若是(shi)组(zu)织(zhi)(zhi)十(shi)分致密(mi)(mi)可(ke)以再结合(he)机(ji)械法(fa)，如(ru)(ru)研磨(mo)或者搅拌加速(su)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)分散(san)。如(ru)(ru)下表(biao)为(wei)二者的(de)(de)区别：胶(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶(mei)(mei)胰(yi)(yi)酶(mei)(mei)来源细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)菌胰(yi)(yi)脏(zang)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)组(zu)织(zhi)(zhi)纤(xian)(xian)维(wei)(wei)(wei)多的(de)(de)硬组(zu)织(zhi)(zhi)软组(zu)织(zhi)(zhi)对(dui)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)影响伤害小长时(shi)间(jian)有损伤作用(yong)(yong)力度缓和强注(zhu)：胶(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶(mei)(mei)分为(wei)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型(xing)以及肝细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)胶(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶(mei)(mei)，根据分离(li)的(de)(de)组(zu)织(zhi)(zhi)类(lei)型(xing)需(xu)选(xuan)择合(he)适(shi)的(de)(de)胶(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶(mei)(mei)类(lei)型(xing)。Q：消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)时(shi)间(jian)如(ru)(ru)何确定(ding)(ding)？A：具体的(de)(de)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)酶(mei)(mei)的(de)(de)量和消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)时(shi)间(jian)可(ke)根据组(zu)织(zhi)(zhi)类(lei)型(xing)和多少进行(xing)调(diao)整。Q：消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)之前为(wei)什(shen)么(me)用(yong)(yong)EDTA?A：EDTA是(shi)一(yi)种非酶(mei)(mei)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)物，又称螯合(he)剂，对(dui)一(yi)些组(zu)织(zhi)(zhi)。转染的(de)(de)目(mu)(mu)的(de)(de)是(shi)产生重(zhong)组(zu)蛋白，或特异性增强或控制转染细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)中的(de)(de)基因表(biao)达。

展开全(quan)部(bu)原(yuan)代(dai)(dai)(dai)2113细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)和(he)(he)传(chuan)(chuan)代(dai)(dai)(dai)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)有(you)(you)含义5261、培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)过(guo)程(cheng)、培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)结果和(he)(he)应用(yong)四(si)个(ge)方(fang)面4102区别：16531、含义不(bu)(bu)(bu)同原(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)是直接(jie)(jie)从生(sheng)物体(ti)获取组织或的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)(yi)部(bu)分进(jin)行培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，也称初(chu)代(dai)(dai)(dai)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)。原(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)是将培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)物放置(zhi)在(zai)体(ti)外(wai)(wai)生(sheng)长(zhang)环境中(zhong)(zhong)持续培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，中(zhong)(zhong)途不(bu)(bu)(bu)分割培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)过(guo)程(cheng)。有(you)(you)几(ji)方(fang)面含义：原(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)代(dai)(dai)(dai)并(bing)非细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)代(dai)(dai)(dai)数，因为培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)过(guo)程(cheng)中(zhong)(zhong)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)经多次(ci)分裂已经产生(sheng)多代(dai)(dai)(dai)子细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)。传(chuan)(chuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)是指需要(yao)将培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)物分割成(cheng)小的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)部(bu)分，重(zhong)新接(jie)(jie)种到另(ling)外(wai)(wai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)器皿（瓶）内，再进(jin)行培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)过(guo)程(cheng)。2、培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)过(guo)程(cheng)不(bu)(bu)(bu)同原(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)基本过(guo)程(cheng)包括(kuo)取材、培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)材料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)制(zhi)备、接(jie)(jie)种、加培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)液(ye)、置(zhi)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)条件下(xia)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)等步骤，在(zai)所(suo)(suo)有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)操(cao)作过(guo)程(cheng)中(zhong)(zhong)，都必(bi)须保持培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)物及生(sheng)长(zhang)环境的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)无菌(jun)。传(chuan)(chuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)时要(yao)注意无菌(jun)操(cao)作并(bing)防止细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)之间的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)交(jiao)叉污(wu)染。所(suo)(suo)有(you)(you)操(cao)作要(yao)尽量靠近酒(jiu)精灯(deng)火焰。每次(ci)只(zhi)进(jin)行一(yi)(yi)(yi)种细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)操(cao)作。取出长(zhang)成(cheng)单层的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)原(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，倒掉(diao)瓶内培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)液(ye)，加入消(xiao)(xiao)化(hua)液(ye)。细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)变圆，相互之间不(bu)(bu)(bu)再连片时将消(xiao)(xiao)化(hua)液(ye)倒掉(diao)，加入新鲜(xian)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)液(ye)，吹打，制(zhi)成(cheng)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)悬液(ye)。3、培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)结果不(bu)(bu)(bu)同原(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)会(hui)分裂。原(yuan)代(dai)(dai)(dai)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)一(yi)(yi)(yi)般(ban)传(chuan)(chuan)至10代(dai)(dai)(dai)左右就(jiu)不(bu)(bu)(bu)容易传(chuan)(chuan)下(xia)去(qu)了，细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)长(zhang)就(jiu)会(hui)出现停滞，大(da)部(bu)分细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)衰老死亡(wang)。细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)接(jie)(jie)种后一(yi)(yi)(yi)般(ban)几(ji)小时内就(jiu)能(neng)贴壁(bi)，并(bing)开始(shi)生(sheng)长(zhang)。本公司(si)生(sheng)产的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)SD大(da)鼠心肌(ji)成(cheng)纤维细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)采(cai)用(yong)混合酶消(xiao)(xiao)化(hua)、密度梯度离心制(zhi)备而来。内蒙古大(da)鼠原(yuan)代(dai)(dai)(dai)细(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)购(gou)买

细胞(bao)操(cao)作(zuo)(zuo)都需(xu)严格按(an)照无菌操(cao)作(zuo)(zuo)进行(xing)。云南(nan)小鼠(shu)原代细胞(bao)分离

本实(shi)用(yong)(yong)(yong)新型涉及细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)(xiang)领域，尤(you)其(qi)涉及的(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)(shi)一(yi)种新型原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)(xiang)。背景技术：现有技术中，原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，是(shi)(shi)指(zhi)由体(ti)内取出组织或细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)进(jin)(jin)行(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，也叫(jiao)初代培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)。原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)离(li)体(ti)时(shi)(shi)间(jian)短，遗(yi)传性(xing)状和(he)体(ti)内细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)相似，适于做(zuo)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)形态、功能(neng)和(he)分(fen)(fen)化等研(yan)究(jiu)。较为严(yan)格地说是(shi)(shi)指(zhi)成(cheng)功传代之前的(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，此时(shi)(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)保持原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)有细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)本性(xing)质，如果是(shi)(shi)正常(chang)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，仍然(ran)保留(liu)二倍体(ti)数。但实(shi)际(ji)上(shang)，通(tong)常(chang)把代至第十代以内的(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)统称(cheng)为原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)。利用(yong)(yong)(yong)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，可(ke)对细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)进(jin)(jin)行(xing)药(yao)物的(de)(de)(de)(de)(de)筛(shai)选(xuan)(xuan)，根据(ju)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)对加(jia)入的(de)(de)(de)(de)(de)化疗(liao)药(yao)物的(de)(de)(de)(de)(de)敏感性(xing)来(lai)帮(bang)助选(xuan)(xuan)择的(de)(de)(de)(de)(de)化疗(liao)方(fang)案(an)，有可(ke)能(neng)起到增(zeng)强疗(liao)效、降低副作(zuo)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)(yong)(yong)。而实(shi)验室(shi)在进(jin)(jin)行(xing)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)过程中，为得到更(geng)多的(de)(de)(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)进(jin)(jin)行(xing)筛(shai)查，往往需要(yao)同(tong)时(shi)(shi)对大量的(de)(de)(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)进(jin)(jin)行(xing)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，而市(shi)面(mian)上(shang)单(dan)层或双层设(she)计(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)(xiang)已(yi)难以满足实(shi)验者的(de)(de)(de)(de)(de)需求，另外市(shi)面(mian)上(shang)也有一(yi)些原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)(xiang)，但其(qi)储藏空间(jian)设(she)计(ji)不合理，空间(jian)利用(yong)(yong)(yong)率(lv)低，在存放大量的(de)(de)(de)(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)皿(min)(min)时(shi)(shi)，其(qi)占地面(mian)积也大，不方(fang)便实(shi)验者存放。同(tong)时(shi)(shi)，无(wu)毒(du)和(he)无(wu)菌(jun)是(shi)(shi)体(ti)外培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)首要(yao)条件，培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)皿(min)(min)作(zuo)为用(yong)(yong)(yong)于细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)的(de)(de)(de)(de)(de)主要(yao)实(shi)验室(shi)器皿(min)(min)，常(chang)存储于细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)(xiang)内进(jin)(jin)行(xing)贮藏培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，市(shi)场上(shang)的(de)(de)(de)(de)(de)大型原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)养(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)(xiang)由于空间(jian)设(she)计(ji)过大。云南(nan)小鼠原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)分(fen)(fen)离(li)

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